凝血分析儀檢測方法
凝血分析儀的前世今生
1910年,Kottman發明了世界上較早的血凝儀,通過測定血液凝固時粘度的變化來反映血漿凝固的時間。20世紀60年代,機械法血凝儀得到開發,出現了早期的平面磁珠法。70年代以后,由于機械、電子工業的發展,使各種類型的全自動血凝儀先后問世。80年代,由于發色底物的出現并應用于血液凝固的檢測,使全自動血凝儀除了可以進行一般的篩選試驗外,尚可以進行凝血、抗凝、纖維蛋白溶解系統單個因子的檢測,使抗凝、纖溶的檢測成為可能。90年代,全自動血凝儀免疫通道的開發將各種檢測方法融為一體,檢測的項目更加全面,為血栓與止血的檢測提供了新的手段,進入了分子生物學時代。
凝血檢測的項目及主要檢測方法
凝血儀主要是用來對血液凝固檢測的一種儀器,主要的檢測項目為:凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)、D-二聚體(D-Dimer)、纖維蛋白(原)降解產物(FDP)、抗凝血酶III(AT-III)
不同類型的凝血分析儀采用的原理不同,目前主要采用的檢測辦法有:凝固法、發色底物法、免疫學法等;開始的血凝儀的檢測原理是基于凝固法的檢測,因為該檢測方法的電流法測量可靠性差,所以逐步被磁珠法和光學法所替代;而目前市面上主流的儀器一般是單獨的光學法或者單獨的磁珠法;這兩種方法學又有何差異呢?
光學法(比濁法)
又分為散射法和透射法,光學法凝血儀是根據凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。根據待驗樣品在凝固過程中光的變化來確定檢測終點的。當向樣品中加入凝血激活劑后,隨著樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程,樣品的光強度逐步增加,儀器把這種光學變化描繪成凝固曲線,當樣品完全凝固以后,光的強度不再變化。光學法凝血測試的優點在于靈敏度高、儀器結構簡單、易于自動化;缺點是脂血、黃疸、溶血樣本測不準,嚴重干擾測不出;從我們目前的認知來看,隨著科學的進步,光學異常、加樣氣泡已經不會成為嚴重的干擾因素。
磁珠法
早期的磁珠法是在檢測杯中放入一粒磁珠,與杯外一根鐵磁金屬桿緊貼呈直線狀,標本凝固后,由于纖維蛋白的形成,使磁珠移位而偏離金屬桿,儀器據此檢測出凝固終點,這類儀器也可稱為平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光學法中樣品本底干擾問題,但存在靈敏度低等缺點。現代磁珠法出現在20世紀80年代末,90年代初進入商品化。現代磁珠法被稱為雙磁路磁珠法。測試原理如下:測試杯的兩側有一組驅動線圈,它們產生恒定的交變電磁場,使測試杯內特制的去磁小鋼珠保持等幅振蕩運動。凝血激活劑加入后,隨著纖維蛋白的產生增多,血漿的粘稠度增加,小鋼珠的運動振幅逐漸減弱,儀器根據另一組測量線圈感應到小鋼珠運動的變化,當運動幅度衰減到50%時確定凝固終點。雙磁路磁珠法的長處在于不受特異血漿的攪擾,在結構上,其檢測原理完全不受溶血、黃疸及高血脂癥的影響,甚至加樣中產生氣泡也不會影響測試結果的優點。缺陷是儀器、試劑成本偏高。